Granülositlerin hemostaza etkilerinin optik agregometre ve tromboelastogram ile incelenmesi

Abstract

Doğal bağışıklık sistemi hücrelerinden olan granülositler, sitoplazmalarındaki granül tiplerine ve çekirdek yapılarına göre diğer lökositlerden ayrılırlar. Sitoplazmalarındaki granüllerin boya alma özelliğine göre nötrofil, eozinofil ve bazofil olarak 3 gruba ayrılırlar. Hemostaz; damar duvarında bir hasar meydana geldiğinde kan akışını engellemeden kanın damar dışına çıkmasını engelleyerek damar bütünlüğünü sağlayan fizyolojik bir süreçtir. İmmünotromboz terimi ile pıhtılaşma aktivasyonunun doğuştan gelen bağışıklık sisteminin fonksiyonuna yardımcı olduğu, bağışıklık sistemi bileşenlerinin detromboza katkıda bulunduğu belirtilmektedir. Bu çalışmada lökosit alt gruplarındangranülositlerin hemostaz üzerine etkileri optik agregometre ve tromboelastogram ileçalışılmıştır. Tam kandan elde edilen granülositler ayrıştırıldıktan hemen sonra (0. saat [G-0]) ve 4 saat boyunca uyarılmadan (G-4) ve lipopolisakkarit ile uyarılarak [G(+)-4] inkübeedildikten sonra deneyler gerçekleştirildi. Agregometrede trombositten zengin plazmaüzerine granülosit eklendi. ADP, kolajen ve epinefrin ile agregasyon uyarılarak trombosit agregasyonu gözlemlendi. Maksimum agregasyon değerleri kontrol grubuna göre değerlendirildi. Tromboelastogram deneylerinde ise trombositten zengin plazmaya granülositeklenerek, Ca+2 varlığında hemostaz süreci gözlemlendi. Değerler kontrol grubunagöre değerlendirildi. 0. saat agregometre deneylerinde granülositler, kontrol grubuna göre ADP ve kolajen ile uyarılan agregasyonlarda maksimum agregasyon değerlerini anlamlı olarak azalttı. Ne granülositlerin 4 saat inkübasyonu ne de LPS ile uyarılmaları, ADP, kollajen ve epinefrin ile uyarılan agregasyonlar üzerinde fark göstermedi. Tromboelastogram deneylerinde 0. saat ve uyarılmayan granülositler hemostaz parametrelerine etki etmezken uyarılan granülositler hemostazı aktive etmiş vehiperkoagülan bir durum oluşturdu. Granülositlerin trombosit agregasyonunu inhibe ederken, uyarıldıklarında hemostazı arttırmaları yöntemler arası farklılıkları ön plana çıkarmanın yanısıra granülositlerin aktivasyon durumlarının da önemli olduğunu göstermektedir.

Granulocytes, which are innate immune system cells, are distinguished from other leukocytes according to the granule types in their cytoplasm and their nuclearstructure. They are divided into three groups: neutrophils, eosinophils and basophils, according to the dye-taking properties of the granules in their cytoplasm. Hemostasis; It is a physiological process that ensures vascular integrity by preventing blood fromflowing out of the vessel without obstructing blood flow when damage occurs to thevessel wall.The term immunothrombosis indicates that coagulation activation helps thefunction of the innate immune system and that immune system components alsocontribute to thrombosis. In this study, the effects of granulocytes, one of the leukocyte subgroups, on hemostasis were studied using optical aggregometer andthromboelastogram. Experiments were performed immediately after the granulocytes obtained fromwhole blood were separated (0th hour [G-0]) and incubated for 4 hours withoutstimulation (G-4) and with stimulation with lipopolysaccharide [G(+)-4]. Granulocytes were added onto platelet-rich plasma in the aggregometer. Plateletag gregation was observed by stimulating aggregation with ADP, collagen andepinephrine. Maximum aggregation values were evaluated compared to the controlgroup.In thromboelastogram experiments, granulocytes were added to platelet-richplasma and the hemostasis process was observed in the presence of Ca+2. Values wereevaluated according to the control group. In 0th hour aggregometer experiments, granulocytes significantly decreased themaximum aggregation values in ADP and collagen-stimulated aggregations comparedto the control group. Neither incubation of granulocytes for 4 h nor stimulation with LPS showed any difference on ADP, collagen, and epinephrine-stimulatedaggregations.In thromboelastogram experiments, while hour 0 and unstimulated granulocytesdid not affect hemostasis parameters, stimulated granulocytes activated hemostasisand created a hypercoagulant state.While granulocytes inhibit platelet aggregation, they increase hemostasis whenstimulated, not only highlighting the differences between methods, but also showing that the activation status of granulocytes is important.