Oksidatif strese dirençli metastatik prostat kanseri hücrelerinde NF-κB’nın siRNA aracılı inhibisyonunun Cabazitaxel duyarlılığı üzerine etkileri

Abstract

Prostat kanseri (PK), erkeklerde en sık görülen kanser türüdür. Hastalığın ileri evrelerinde metastatik kastrasyon dirençli prostat kanseri (mKDPK) gelişmekte ve tedavi seçenekleri yetersiz kalmaktadır. Cabazitaxel, mKDPK tedavisinde kullanılan ikinci nesil taksan türevi bir kemoterapi ajanıdır. Ancak bu ajana karşı gelişen direnç ve yan etkiler, tedavinin uzun dönem başarısını sınırlamaktadır. NF- κB sinyal yolunun hem oksidatif stres yanıtı hem de ilaç direncinde etkili olduğu bilinirken, bu yolağın hedeflenmesi ile Cabazitaxel’e olan duyarlılığın artırabileceği öne sürülmektedir. Mevcut tez çalışmasında, NF-κB p65 (RelA) alt biriminin siRNA aracılı sessizleştirilmesinin oksidatif strese dirençli LNCaP-HPR5M hücrelerinde Cabazitaxel duyarlılığı üzerine etkileri araştırılmıştır. LNCaP ve LNCaP-HPR5M hücrelerinde, siRNA-RelA ile gen sessizleştirmesi sonrası Cabazitaxel tekli ve kombin tedavileri uygulanarak hücrelerde fonksiyonel analizler gerçekleştirilmiştir. Sitotoksisite WST-1 testiyle, apoptoz Annexin V ve multikaspaz analizleriyle, reaktif oksijen türleri (ROS) düzeyleri canlı hücre ROS boyama ve akış sitometrik analizle ve NF-κB p65 sinyal yolağı ilişkili protein ekspresyonları Western Blot ile analiz edilmiştir. Bulgular, siRNA-RelA uygulamasının NF-κB p65 sinyal yolağında disregülasyona yol açarak Cabazitaxel’in apoptotik ve pro-oksidan etkilerini anlamlı biçimde arttırdığını göstermiştir. Sonuçlar, oksidatif strese dirençli PK hücrelerindeNF- κB yolağının hedeflenmesinin Cabazitaxel duyarlılığının arttırılmasında terapötik potansiyel taşıdığını ortaya koymuştur.Prostate cancer (PC) is the most common type of cancer in men. In advanced stages of the disease, metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC) develops, and treatment options remain inadequate. Cabazitaxel is a second-generation taxane-derived chemotherapy agent used in the treatment of mCRPC. However, resistance to this agent and its associated side effects limit the long-term success of the treatment. The NF-κB signaling pathway is known to play a significant role in both the oxidative stress response and drug resistance. Therefore, targeting this pathway may increase sensitivity to Cabazitaxel. In the present thesis study, the effects of siRNA-mediated silencing of the NF-κB p65 (RelA) subunit on Cabazitaxel sensitivity were investigated in LNCaP-HPR cells, which are resistant to oxidative stress. Following gene silencing with siRNA-RelA in LNCaP and LNCaP-HPR cells, treatments with Cabazitaxel—both alone and in combination—were applied, and functional analyses were conducted. Cytotoxicity was assessed by WST-1 assay; apoptosis was evaluated using Annexin V and multicaspase assays; reactive oxygen species (ROS) levels were measured via live cell ROS staining and flow cytometric analysis; and the expression of NF-κB p65 signaling pathway-related proteins was examined by Western blot. The findings demonstrated that siRNA-RelA administration significantly increased the apoptotic and pro-oxidant effects of Cabazitaxel by dysregulating the NF-κB p65 signaling pathway. These results suggest that targeting the NF-κB pathway in oxidative stress-resistant prostate cancer cells has therapeutic potential for enhancing Cabazitaxel sensitivity.