Koyun oositlerinin in vitro maturasyonu sırasında melatonin ilavesinin sıcaklık stresi ve embriyo gelişimi üzerine etkisi

Abstract

Bu çalışmada koyunlarda in vitro maturasyon sırasında uygulanan melatonin hormonunun sıcaklık stresi üzerine etkisinin embriyonik gelişim düzeyinde araştırılması amaçlanmıştır. in vitro embriyo (IVF) üretim aşamlarından en kritik noktalardan birisi in vitro maturasyon aşamasında oositlerin mature olma oranlarıdır. Bu aşamada meydana gelen streslere bağlı olarak reaktif oksijenlerin artması hücrelerde hasarlara sebep olmaktadır. Sunulan çalışmada melatonin hormonunun in vitro ortamda oosit gelişimi üzerine etkisini değerlendirmek amacıyla; maturasyon medyumuna 10-⁷ M melatonin hormunu ilave edildi ve 38 °C – 41 °C sıcaklıklarda inkübe edildi. Mezbahada kesilen koyunların ovaryumları 35 °C’ de ve fizyolojik tuzlu su içerisinde laboratuvara getirildi ve folliküller bistüri ile kesilerek oositlerin elde edilmesi sağlandı. Elde edilen oositler ilgili grupların maturasyon medyumlarına aktarıldı ve inkübe edildi. Maturasyon sürecinin tamamlanmasının ardından fertilizasyon sürecine geçildi. Embriyonik gelişim aşamaları bölünme, marula, blastosit aşamaları olarak değerlendirildi. Bölünme oranları kıyaslandığında en yüksek oran G39M, en düşük değer G41 elde edildi ve istatiksel olarak anlamlı bir fark vardır (P<0,05). Morula oranlarında ise en yüksek değer G39M gözlenirken en düşük değer G41 elde edildi (P<0,05). Elde edilen blastosist oranları en iyi G39M de elde edildi. Buna göre melatonin sıcaklık stresinde bölünme ve marula aşamasında etki gösterirken blastosit aşamasında anlamlı ölçüde azalma oldu. (P<0,05)In this study, the effect of melatonin hormone administered during in vitro maturation (IVM) on heat stress was investigated at the embryonic development level in sheep. Among the critical stages of in vitro embryo (IVF) production, the maturation rate of oocytes during the IVM phase plays a pivotal role. Stress factors occurring during this stage can lead to an increase in reactive oxygen species (ROS), which in turn may cause cellular damage. To evaluate the effect of melatonin on oocyte development under in vitro conditions, 10-⁷ M melatonin was added to the maturation medium, and oocytes were incubated at temperatures of 38 °C and 41 °C. Ovaries from sheep slaughtered at a local abattoir were transported to the laboratory in physiological saline at 35 °C. Follicles were dissected using a scalpel to collect the oocytes. Retrieved oocytes were then transferred into the maturation media corresponding to their respective experimental groups and incubated accordingly. Upon completion of the maturation period, the fertilization process was initiated. Embryonic development was assessed based on cleavage, morula, and blastocyst stages. When comparing cleavage rates, the highest rate was observed in group G39M, while the lowest was recorded in group G41, with statistically significant differences between the groups (P < 0.05). Similarly, for morula rates, the highest was observed in G39M and the lowest in G41 (P < 0.05). The highest blastocyst formation rate was also recorded in G39M. These findings suggest that melatonin positively influences the cleavage and morula stages under heat stress conditions, although a significant decrease was observed at the blastocyst stage (P < 0.05).