Browsing by Author "Polat, Yasemin Özen"
Now showing 1 - 2 of 2
- Results Per Page
- Sort Options
Item In vitro kültürde zenginleştirilen domuz folikül ve amniyon hücrelerinden RNA ekstraksiyonu(Uludağ Üniversitesi, 2011-06-30) Polat, Yasemin Özen; Özalp, Gözde R.; Evke, Elif; Batmaz, Özocak Elçin; Salcı, E. Sinem Özdemir; Kahveci, Zeynep; Uludağ Üniversitesi/Veteriner Fakültesi.; Uludağ Üniversitesi/Tıp Fakültesi /Tıbbi Genetik Anabilim Dalı.; Uludağ Üniversitesi/Tıp Fakültesi/Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı.Amniyotik hücreler fetustan köken alan ve birçok farklı doku tipine dönüşebilen hücrelerdir. Bu durum hücrelerin birçok medikal uygulamada kullanılmasına olanak sağlar. Amniyotik ve foliküler sıvılar, prenatal tanıda çok etkili bir metod olan amniyosentez ile toplanmaya çalışılmıştır. Uygulamadan 48 saat sonra domuzlarda abortus görüldüğü ve toplanan hücre sayısının yeterli olmamasından dolayı, örneklerin steril şartlar altında operasyonla toplanmasına karar verilmiştir. Alınan hücreler yeterli sayı ve mitotik aktiviteye ulaşıncaya kadar hücre kültüründe geliştirilmiştir. Takibinde Trizol ile muamele edilerek hücrelerden RNA izolasyonu yapılmıştır. Amniyotik ve foliküler hücrelerin iyi kalitede üremelerine rağmen RNA izolasyonlarından alınan sonuçlar çok tatmin edici olmamıştır. RNA bütünlüğü agaroz jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Elektroforez sonuçlarına göre foliküler hücrelerden elde edilen örneklere ait 28s, 18s ve 5s rRNA bantları gözlenirken, amniyotik hücre kültürlerine ait örneklerde hiç bant gözlenmemiştir. Bu sonuçlar domuza ait amniyotik ve foliküler hücrelerin in vitro ortamda üretilebildiğini göstermiştir. Ancak amniyon hücrelerine ait başarısız RNA izolasyonları açıklanamamaktadır. Amniyotik hücreler için hazırlanacak kültüre bazı zenginleştirmeler yapılabileceği yada izolasyon için daha farklı metotların kullanılabileceğini önerilebilir..Item Sakız koyun ırkında BMPR-IB geninde çoklu doğuma neden olabilecek FEC B alleli varlığının PCR-RFLP yöntemi ile araştırılması(Uludağ Üniversitesi, 2006) Polat, Yasemin Özen; Gülten, Tuna; Uludağ Üniversitesi/Sağlık Bilimleri Enstitüsü/Zootekni Anabilim Dalı.Dünyada ve Türkiye'de koyun ve koyun ürünleri ekonomik bakımdan büyük değer taşır.Bu nedenle koyun yetiştiriciliğinde hayvan ıslahının temel ilkesi olan hayvan başına verim düzeyinin yükseltilmesi amaçlanır. Damızlığa ayrılan hayvanlar arasında üstün verimli hayvan oranının fazla olması döl veriminin yüksek olması ile mümkündür. Dünya genelinde bulunan koyun populasyonlarında 1980 yılından itibaren dölverimi ile ilişkili major genlerin kalıtım özellikleri ve DNA testleri uygulanarak yapılan çalışmalarda, major genlerin döl verimi performansını önemli ölçüde artırma potansiyeline sahip olduğu görülmüştür.Yapılan çalışmalarda BMPR-IB, BMP-15 ve GDF-9 genlerinde bulunan mutasyonların koyunlarda ovulasyon oranını artırarak döl verimi üzerinde etkili olduğu gösterilmiştir.Özellikle 6. kromozom üzerindeki BMPR-IB geninde bulunan ve Booroola Merinosunda FecB allelinin oluşmasına yol açan mutasyonun belirlenmesi ile ebeveyn kayıtlarına ihtiyaç duyulmadan %100 doğru sonuç veren DNA testinin geliştirilmiş olması bu mutasyonun diğer ırklarda da araştırılmasına olanak sağlamıştır.Çoklu doğum özelliği olan ve Türkiye'de yetiştirilen Sakız koyun BMPR-IB genindeki Fec B allelinin PCR-RFLP yardımıyla aranmasının amaçlandığı bu çalışmada Türkiye'de çeşitli yerlerde (Bandırma, İzmir-Çeşme ve Urla, Çanakkale-Ayvacık ) yetiştirilen 388 adet Sakız ve 18 adet Sakız-Kıvırcık melezi koyundan toplam 406 adet kan örneği EDTA'lı tüplere alınmıştır. Fenol/kloroform yöntemi ile DNA izolasyonu yapılan örneklerden Polimeraz Zincir Reaksiyonu (Polymerase Chain Reaction: PCR) yöntemiyle Test F2 veTest R15 primerleri kullanılarak DNA amplifikasyonları gerçekleştirilmiştir. Agaroz jelelektroforezi kullanılarak görüntülenen PCR ürünlerine daha sonra Ava II restriksiyon enzimiile kesim yapılmıştır. Sonuç olarak incelenen 406 baş koyunda BMPR-IB geninde FecB alleli belirlenememiştir.